Gimė Nelahozevuose (Nelahozeves) netoli Prahos, kur praleido didžiąją dalį gyvenimo. Mokėsi muzikos Prahos vargonų mokykloje, gerai griežė smuiku ir altu. Grojo altu orkestre, tačiau turėjo pragyventi iš pamokų, todėl jam likdavo mažai laisvo laiko. 1871 m. metė darbą orkestre, kad galėtų rašyti muziką. Pamilęs mokinę, parašė jai dainų ciklą „Kipro medžiai“ (Cyprus trees), tačiau, jai susituokus su kitu, pats 1873 m. vedė jos seserį Aną Cermakovą (Anna Cermakova).
1892–1895 m. Dvoržakas dirbo Nacionalinės muzikos konservatorijos Niujorke direktoriumi. Vėliau Dvoržakas grįžo į Prahą. Nuo 1901 m. iki mirties buvo Prahos konservatorijos vadovas. Gyvenimo gale turėjo finansinių problemų. Palaidotas Prahoje, Vyšehrad kapinėse.
Be muzikos, Dvoržakas labai domėjosi lokomotyvais ir balandžių veisimu.
